《生物化学与分子生物学实验教程》为适应高等医学院校的实验教学改革和发展需要而编写。分为生化与分子生物学实验（包括基础性实验、综合性实验和创新设计实验）与生化与分子生物学基本技术两篇。在实验项目的设置上，除了蛋白质、核酸的分离纯化分析、酶学、糖类、脂类分析等基础实验外，大部分的综合性实验和创新设计实验则是来源于教师们的科研项目。在实验的基础理论方面，增加了近年来常用的RNA干扰等较新的技术。每一篇有英文小结，附录中有常用仪器、技术等中英文词汇对照表。《生物化学与分子生物学实验教程》内容较新颖，体系较完整，不同层次实验的培养目标有所侧重，便于基础医学等专业不同层次学生选择。
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目录
前言
第一篇 生物化学与分子生物学实验
第一章 基础性实验 3
实验1 蛋白质的呈色反应、沉淀现象观察及等电点的测定 3
实验2 蛋白质含量的测定 6
实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 10
实验4 红细胞葡糖-6-磷酸脱氢酶活性测定 12
实验5 血清丙氨酸转氨酶活性测定（紫外速率法及改良穆氏法） 17
实验6 糖化血红蛋白的测定 21
实验7 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳 23
实验8 血红蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 25
实验9 血糖测定 27
实验10 胰岛素、肾上腺素对家兔血糖浓度的影响 31
实验11 血清总胆固醇测定 33
实验12 质粒DNA的提取、酶切与鉴定 37
实验13 酵母RNA的成分鉴定 40
实验14 PCR扩增G6PD基因外显子11-12片段 41
实验15 尿中酮体的检出 43
实验16 血清尿素氮测定（二乙酰一肟法） 44
第二章 综合性实验 47
实验17 真核细胞基因组DNA的提取、定量和纯度测定 47
实验18 小鼠基因组DNA的Southern blotting分析 49
实验19 小鼠脑组织总RNA提取与RT-PCR获取真核基因片段 54
实验20 pMD19-G6PD重组子的蓝白斑筛选及酶切鉴定 59
实验21 pThioHis (A)-G6PD重组表达质粒的鉴定 63
实验22 G6PD重组酶的诱导表达、分离及比活性测定 66
实验23 ATP、ADP和NADPH对G6PD酶促反应的影响 70
实验24 小鼠PKC基因的克隆、鉴定及其6His融合蛋白的大肠杆菌表达和纯化 76
实验25 SDS-PAGE测定蛋白质的表观分子量 83
实验26 小鼠血清IgG的Western blotting分析 87
实验27 血红蛋白的等电聚焦分离及其等电点测定 94
实验28 醋酸纤维薄膜电泳技术分离乳酸脱氢酶同工酶 97
实验29 血清蛋白的盐析及清蛋白/球蛋白的测定 100
尖验30 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳分离及定量测定 103
实验31 酶的特异性及温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 106
实验32 小鼠肝细胞核的分离、纯化与鉴定 109
实验33 动脉硬化指数的计算 112
实验34 糖的硅胶G薄层层析分析鉴定 114
第三章 创新设计实验 117
实验35 乙醛脱氢酶2基因型的检测 117
实验36 针刺“足三里”穴位对家兔血糖浓度的双向调节作用 120
实验37 小鼠PKCε相互作用蛋白质的捕获、鉴定 122
实验38 小鼠肝总蛋白质的双向电泳分离 125
实验39 人血浆同型半胱氨酸的测定（ELISA方法） 129
实验40 自毁容貌综合征的生化与分子生物学分析 131
实验41 G6PD缺陷的诊断及其发病的分子基础 132
实验42 HL-60细胞中DAPK基因甲基状态的检测 133
实验43 胰岛素促进HepG2细胞对葡萄糖吸收的检测 135
第二篇 生物化学与分子生物学技术
第四章 分光光度技术 141
第一节 分光光度技术的基本原理 141
第二节 分光光度计的组成与结构 143
第二节 分光光度技术的应用 145
第五章 电泳技术 148
第一节 概述 148
第二节 几种常用电泳简介 149
第六章 层析技术 152
第七章 离心技术 156
第一节 离心技术的基本原理 156
第二节 离心机的类型 157
第三节 制备型离心的分离方法 158
第四节 离心操作的注意事项 159
第八章 聚合酶链反应与印迹技术 161
第一节 PCR技术 161
第二节 印迹技术 165
第九章 基因工程技术 170
第一节 基因工程技术的相关概念 170
第二节 基因工程技术的基本原理及技术路线 171
第三节 基因工程技术在医学领域的应用 175
第十章 荧光标记技术 177
第一节 荧光现象 177
第二节 荧光探针 179
第三节 荧光标记样品的检测 180
第十一章 RNA干扰技术 187
第一节 RNA干扰的作用机制 187
第二节 RNA干扰技术的应用 189
第十二章 生物芯片技术 191
第一节 基因芯片 191
第二节 蛋白质芯片 193
第十三章 双向凝胶电泳 196
第十四章 蛋白质三维结构建模 200
第一节 蛋白质结构相关知识 200
第二节 蛋白质结构预测实例 201
参考文献 205
附录一 生物化学与分子生物学常用数据库和软件 208
附录二 生物化学与分子生物学常用试剂和培养基的配制方法 210
附录三 生物化学及分子生物学实验常用缩略语 213
附录四 生物化学与分子生物学实验常用词中英文对照 216
获得的，是否能够识别其他种属来源的同一种蛋白质并与其结合。为了解这一问题，首先应该向提供抗体的厂家了解情况，其次是查文献了解是否有其他人成功应用的范例，再就是检索序列资料数据库，比较不同种属来源的相同种类蛋白质的相关多肽片段的氨基酸序列的相似程度。如果对某一抗体的不同种属的适用性情况无法了解，那就别无选择，须要先少量购买一些抗体，做一个预实验来确定该抗体的适用性。
选择抗体还需要注意的一点是，一般的抗目标蛋白抗体的种属来源应该与待分析蛋白质样品的种属来源不同。否则在应用二抗检测进行显示时，极易受蛋白质样品中存在的IgG干扰，影响结果的解释，尤其对微量蛋白质的检测极为不利，应该注意尽量避免这种情况的出现。
第二抗体的选择主要是针对第一抗体的种属来源和检测显示手段这两方面进行的，一般不需要再考虑其他方面。
2.过夜温浴的注意事项
如果需要过夜、长时间抗体温浴，需要防止杂菌大量繁殖。一般可以于4=C进行温浴，如果没有4℃温浴条件，可以在温浴液中加入防腐剂。对于待用辣根过氧化物酶标记二抗进行检测时，可以在温浴液中加防腐剂硫柳汞至终浓度为0.05％。
【思考题】
1.一般科研工作实践中，转印膜都需要进行染色和记录结果，并且与最终的Westernblotting结果进行对照。你认为这有必要吗？为什么？
2.蛋白质印迹分析能否用于直接检测未知蛋白质？为什么？
3.如果某一蛋白质的存在量足以用染色法直接显示，是否仍然会有必要应用操作较为烦琐的蛋白质印迹实验？为什么？
附：增强的化学发光显示方法
用增强的化学发光显示方法（enhanced chemiluminescence，ECL）进行酶标免疫检测比常用的呈色显示方法的检测灵敏度高100～1000倍甚至以上，现在国内外实验室已经将增强的化学发光显示方法作为蛋白质印迹分析的常规检测方法使用。此处介绍的增强的化学发光显示方法的所用试剂可以在市场上买到白行配制，与市场上可以购买到的成品增强的化学发光显示试剂相比，灵敏度上稍逊一筹，但是费用极为低廉，适合于一般实验室采用。但是须要注意，使用增强的化学发光显示方法的先决条件之一是需要有暗室可用。
……
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前言/序言
医学实验教学是医学教育的重要组成部分，是培养学生实践能力、科学思维和创新精神的主要途径，因此，提高医学实验教学质量将有助于提升整体医学教育水平。生物化学与分子生物学实验技术是当代医学研究的重要手段和方法，也是医学相关专业和各层次学生的必修实验课。为了适应高等医学院校实验教学改革和发展的需要，构建多层次、多模块的医学生物化学与分子生物学实验教学体系，我们编写了本教材。
本教材分为两篇，第一篇为生物化学与分子生物学实验，第二篇为生物化学与分子生物学技术。根据实验内容和要求，结合教学逻辑和规律，为满足不同层次学生的需求，将实验分为基础性实验、综合性实验和创新设计实验3个模块。基础性实验有助于巩固学生基本理论知识和培养学生基本实验操作技能；综合性实验多来源于教师的科研项目，应用了多种生物化学与分子生物学实验技术，经过多轮教学的实际检验，有利于培养学生的综合分析能力；创新设计实验从临床病例出发，通过设计实验方案，探讨疾病的生物化学与分子机制，培养学生的科研能力。
本教材注重实验的科学性与实用性相结合、知识传授与素质培养相结合、实验技术与临床应用相结合。为了便于学生自主学习，还介绍了生物化学与分子生物学常用软件和网络资源。此外，为配合双语教学的开展，附录中有本教材中使用的仪器、常用试剂、名词等的中英文对照。
各高等医学院校根据各专业各层次学生的培养目标和要求，可选择本教材中不同模块的实验项目实施实验教学。此外，本
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