为了更好地适应医学教育改革和发展的需要,实现生物化学与分子生物学实验课程的目标,我们在第2版的基础上,编写了《生物化学与分子生物学实验教程》第3版。全书为两篇:第一篇系统介绍了生物化学与分子生物学实验基本知识与理论;第二篇为生物化学与分子生物学实验操作,共修订精选了51个生物化学与分子生物学的具体实验。另外,在附录中汇集了常用生物化学与分子生物学试剂的配制方法。本书在内容框架上进行了调整,对实验操作进行了分类。内容设置方面既包括生物化学与分子生物学的基本实验技术和方法、生物信息学工具在生物化学与分子生物学研究中的应用,也特别强调基本技术与应用、进展结合,如实验技术与临床诊断和治疗应用的结合,前沿分子生物学技术引入等。
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目录
第一篇 生物化学与分子生物学实验基本知识与理论
第一部分 生物化学与分子生物学实验基本知识 1
第二部分 生物化学实验基本技术理论 14
第三部分 分子生物学实验基本技术理论 46
第四部分 生物化学与分子生物学专业常用生物信息学分析 71
第二篇 生物化学与分子生物学实验操作
第五部分 蛋白质理化性质 84
第1章 蛋白质的两性反应与等电点的简易测定 84
第2章 蛋白质的沉淀反应 86
第3章 蛋白质的热变性 88
第六部分 蛋白质含量测定 91
第4章 凯氏定氮法测定蛋白质含量 91
第5章 Folin-酚试剂法测定蛋白质含量 94
第6章 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 96
第7章 紫外吸收法测定蛋白质含量 98
第8章 BCA法测定蛋白质含量 100
第9章 溴甲酚绿法测定白蛋白含量 102
第七部分 蛋白质及氨基酸分离 104
第10章 醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白 104
第11章 SDS-PAGE蛋白电泳 106
第12章 单向上行纸层析分离氨基酸 109
第13章 凝胶柱层析分离蛋白质 111
第八部分 酶活性及酶促反应速度检测 115
第14章 温度对酶活性的影响 115
第15章 pH对酶活性的影响 116
第16章 抑制剂和激活剂对酶活性的影响 117
第17章 尿淀粉酶活性的测定 120
第18章 酶反应速度与米氏常数测定 121
第九部分 营养物质及代谢产物测定 126
第19章 血清葡萄糖的测定 126
第20章 血清甘油三酯的测定 128
第21章 血清胆固醇的测定 130
第22章 血清高密度脂蛋白胆固醇及其亚组分测定 134
第23章 血清尿素含量测定(脲酶 - 谷氨酸脱氢酶法) 136
第24章 血液和尿中肌酐含量测定 138
第十部分 核酸分离 141
第25章 动物组织DNA的分离提取、鉴定及含量测定 141
第26章 动物组织RNA的分离提取、鉴定及含量测定 143
第十一部分 PCR技术 145
第27章 常规PCR 145
第28章 RT-PCR 146
第29章 实时定量PCR 149
第十二部分 重组DNA技术 152
第30章 质粒DNA的分离提取 152
第31章 质粒DNA的酶切、电泳及DNA片段的回收 153
第32章 DNA片段的连接 156
第33章 感受态细菌的制备、重组DNA的转化与筛选 158
第34章 外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 161
第十三部分 印迹技术 163
第35章 DNA的分子杂交——Southern印迹法 163
第36章 RNA的分子杂交——Northern印迹法 166
第37章 蛋白质的免疫印迹——Western印迹法 169
第38章 荧光原位杂交技术——FISH技术 171
第十四部分 综合性实验 174
第39章 cDNA文库的构建 174
第40章 双萤光素酶报告基因检测 181
第41章 电泳迁移率变动分析实验 184
第42章 染色质免疫沉淀实验 191
第43章 酵母双杂交实验 196
第44章 RNA干扰实验 201
第45章 蛋白质免疫共沉淀实验 206
第46章 RNA免疫共沉淀实验 208
第47章 体外蛋白质结合分析实验 210
第48章 单细胞转录组测序技术实验 211
第49章 CRISPR/Cas9基因组编辑技术 216
第50章 气相色谱-质谱联用技术检测血浆同型半胱氨酸 223
第51章 Seahorse监测细胞能量代谢水平 226
附录
附录1 化学试剂分级与注意事项 229
附录2 常用缓冲液的配制 231
附录3 硫酸铵饱和度计算表 237
附录4 常用培养基及抗生素的配制 239
附录5 离心机转速(r/min)与离心力(RCF)的换算 240