分子生物学实验（第二版）_李峰,陈姿喧_9787568082891

　　分子生物学实验（第二版）分三部分，共13章：第一部分分为4章，介绍分子生物学实验基础知识，包括实验室规则、实验室安全知识、常用仪器及其使用、常用培养基和抗生素溶液的配制，以及GenBank数据库；第二部分介绍分子生物学常用实验技术，从第5章到第10章，含11个实验，分别介绍质粒的提取、酶切、电泳、转化、重组及鉴定、PCR技术、核酸杂交技术、外源基因的表达及分离纯化技术；第三部分为分子生物学综合性、研究性实验，从第11章到第13章，含 6个实验。　　本书可供生物类、农学类、食品类、药学类等专业的本科院校师生，科研院所科研人员和企事业单位技术人员等使用

随着分子生物学实验技术的迅速发展，生命科学在理论与应用上都取得了惊人的进展。分子生物学实验技术逐渐系统化，现已成为生命学科各领域研究的常规技术。在十几所本科院校和华中科技大学出版社的大力支持和帮助下，我们编写了这本《分子生物学实验》。为适应创新人才培养要求，我们在实验教学中进行了大量的改革，并体现在教材中。本教材第一版出版后，被全国多所高校选为实验教材，得到任课教师和读者的好评。同时，对不足之处也提出了很多宝贵意见。在第一版的基础上，我们对部分内容进行了更新和完善，并新增了一些实验项目。本教材分三部分，共13章：第一部分分为4章，介绍分子生物学实验基础知识，包括实验室规则、实验室安全知识、常用仪器及其使用、常用培养基和抗生素溶液的配制，以及GenBank数据库；第二部分介绍分子生物学常用实验技术，从第5章到第10章，含13个实验，分别介绍质粒DNA的提取、酶切、电泳、转化、重组及鉴定、PCR技术、核酸杂交技术、外源基因的表达及分离纯化技术；第三部分为分子生物学综合性、研究性实验，从第11章到第13章，含6个实验。本教材部分实验项目的设置体现了编者所在高校开设的分子生物学实验特色。通过分子生物学实验，系统培养学生在分子生物学方面的基本技术和技能，通过学生的独立实验设计和实践，培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力。参加本次教材编写的有：湖南文理学院的李峰、李荣、张运生、郝小花，北京理工大学陈姿喧，大连海洋大学王秀利，哈尔滨工业大学刘川鹏、宁夏大学罗仍卓么、王兴平，长治学院雷海英，宿州学院冯凡，辽宁大学杨哲，塔里木大学王有武，山西农业大学段永红。另外，淮阴工学院贾建波、孙金凤，唐山师范学院范永山、张运峰，北京理工大学马宏，河南科技大学侯典云，重庆邮电大学何晓红，陕西科技大学李红心，嘉兴学院朱长俊参与了第一版的编写工作，在此表示衷心的感谢。本教材可供生物类、农学类、食品类、药学类等专业的本科院校师生，科研院所科研人员和企事业单位技术人员等使用，也可供其他相关专业的学生选修或自学时参考。第二版教材虽然经编者认真勘校，还是会存在某些不妥之处，敬请同行及广大读者批评指正。

第一部分分子生物学实验基础知识

第1章分子生物学实验室规则和安全/2

1.1实验室一般规则/2

1.2实验室常识/2

1.3实验室安全基础知识/3

1.4实验室合理设计和布局/4

1.5实验室急救/4

1.6废弃物、放射性物质及有毒物质的处理/5

第2章分子生物学实验常用仪器设备及其操作/7

2.1分子生物学实验常用仪器设备/7

2.2冷冻离心机/8

2.3电泳仪/9

2.4分析天平/10

2.5分光光度计/10

2.6数字式酸度计/11

2.7普通PCR仪/12

2.8实时荧光定量PCR仪/13

2.9凝胶成像系统/14

2.10多功能微孔板酶标仪/15

2.11摇床/16

2.12水的净化装置/16

2.13消毒设备/17

第3章细菌培养常用培养基和抗生素溶液的配制方法/19

3.1常用培养基的配制方法/19

3.2常用抗生素溶液的配制方法/20

第4章GenBank数据库简介/22

4.1概述/22

4.2GenBank的建立与发展/23

4.3GenBank数据库结构/25

4.4基因基本信息检索/29

4.5GeneBank在分子生物学中的应用/30

分子生物学实验目录第二部分分子生物学常用实验技术

第5章核酸的制备/36

5.1核酸制备的原理与方法/36

5.2质粒的生物学特性/39

5.3常用克隆载体的特征/41

实验1真核生物基因组DNA提取/42

实验2总RNA的提取及鉴定/44

实验3质粒DNA的微量提取和鉴定/48

第6章DNA的酶切和凝胶电泳/51

6.1限制性核酸内切酶的特性及应用/51

6.2琼脂糖凝胶电泳/53

6.3聚丙烯酰胺凝胶电泳/55

实验4DNA的限制性核酸内切酶酶切及凝胶电泳/57

第7章DNA转化/61

7.1感受态细胞的制备/61

7.2转化/61

实验5大肠杆菌感受态细胞的制备和转化/63

第8章DNA重组的基本流程和方法/68

8.1目的基因的获取/68

8.2DNA分子的体外重组/69

8.3DNA重组体的导入/70

8.4受体细胞的筛选/72

8.5基因表达/73

实验6DNA片段的黏性末端连接法/74

实验7DNA片段的黏平端连接法/75

实验8重组子的筛选与鉴定/77

第9章聚合酶链式反应技术/80

9.1常规PCR技术的原理及操作/80

9.2引物设计原则及合成/84

9.3PCR产物的纯化与鉴定/85

9.4PCR技术的延伸及应用/87

实验9PCR扩增特异性DNA片段及扩增产物的纯化与鉴定/91

实验10实时荧光定量PCR技术检测基因的表达量/93

第10章核酸杂交技术/98

10.1几种核酸探针标记方法/98

10.2核酸探针制备和纯化技术/101

实验11核酸探针制备和纯化/109

实验12菌落原位杂交法/112

实验13miRNA原位杂交/114

第三部分分子生物学综合性、研究性实验

第11章外源基因的表达/118

11.1外源基因在原核生物中的表达/118

11.2外源基因在酵母细胞中的表达/125

实验14外源基因在大肠杆菌中的诱导表达/130

实验15SDSPAGE电泳检测表达的外源蛋白/131

实验16脂肪酶基因在枯草杆菌中表达及表达产物的研究/133

实验17外源基因在酵母细胞中表达及表达产物的研究/135

第12章利用分子生物学技术进行细菌的种属鉴定/137

12.1微生物分类鉴定方法的发展/137

12.216S rDNA分类鉴定技术的原理/138

实验18利用16S rDNA序列分析技术进行细菌种属的鉴定/139

第13章基因表达差异的分析/144

13.1差减杂交/144

13.2mRNA差异显示反转录PCR/145

13.3cDNA代表性差异分析/145

13.4差减抑制消减杂交方法/146

实验19半定量RTPCR技术检测基因的表达差异/147

附录/152

附录A常用单位及换算方法/152

附录B常用核酸、蛋白质换算数据/152

附录C核酸的单位及有关数据/153

附录D常见核酸分子的长度和相对分子质量/153

附录E色素在聚丙烯酰胺凝胶中的移动参数/154

参考文献/155

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