生物化学实验教程(第二版)包括两篇共10章。第一篇是生物化学实验基础,主要是规范学生实验行为,介绍传统的、现代的生物化学实验技术。第二篇是生物化学实验,按照配套教材《生物化学》的知识体系,根据参编院校实验目录和部分文献,选编了62个实验,包括基础性实验、综合性实验和设计性实验。最后是附录,选择了常用的实验数据共26个表格供参考。本书可作为应用型本科院校各类理工科专业生物化学实验教材或参考书。
这是应用型本科系列教材,针对性、实用性强。第一版使用多年,改版后更加成熟。
生物化学是生物科学、生物技术、生物工程、食品工程、应用化学,以及农、林、医等专业的基础学科。生物化学是以实验为基础的学科,生物化学实验的技术和方法直接推动了生物化学的发展。相对于理论教学,生物化学实验的教学具有实践性、综合性和创新性。生物化学实验教学的宗旨是让学生掌握生物化学的基本实验方法和基本技能,培养学生观察问题、分析问题和解决问题的能力,培养学生严谨、务实、创新的科学作风,为日后从事相关工作和研究奠定坚实的知识基础。
国家积极引导和推动地方本科高校向应用型高校的转型与发展,近年来应用型高校建设呈现良好势头。为适应应用型本科高校教材建设的形势,华中科技大学出版社组织了全国应用型本科院校化学课程统编教材的编写工作。多所院校一线教师结合多年的实验教学经验,围绕“宽口径、应用型、高素质”的目标,突出实用、适用、够用和创新的“三用一新”特点,共同编写了这本生物化学实验教程。本书第一版问世后,承蒙读者厚爱,被全国不少应用型高校选用为实验教材,已重印多次。许多任课教师和读者给予好评,普遍反映该教材编写风格简明、实验方案顺畅、实验结果明显。同时,对不足之处也提出了许多宝贵意见。在此,全体编者向各位同仁和读者表示衷心的感谢。
全书共分两篇10章。第一篇是生物化学实验基础,主要是规范学生实验行为,介绍传统的、现代的生物化学实验技术。第二篇是生物化学实验,根据参编院校实验目录和部分文献,选编了65个实验,包括基础性实验、综合性实验和设计性实验。选编这些实验,一是为了充分将生物化学技术应用于实验教学,二是为了配合本系列统编教材《生物化学》的编排体系,三是为了适应各地应用型高校发展的不均衡性,方便各校有选择性地开展实验教学。设计性实验均为编者在科研或指导学生课题研究中据实设计的,旨在培养部分学生的科研、创新能力。最后是附录,附以生物化学实验中常用的实验数据。本书可作为全国应用型本科院校各类理工科专业生物化学实验教材或参考书。
此次编写分工如下:聊城大学东昌学院王金亭、吴广庆编写第1、2章和实验1、2、6~8、16、22、28、30、31、36、43、44、59、64,湖南农业大学方俊、周晓明、胡超编写第3章第4、5节和实验4、11、17~19、23、26、37、52、55、62,湖南文理学院李峰和李荣、宁夏大学王兴平编写第3章第1、2节和实验10、21、61,武昌首义学院李横江编写第3章第3、6节和实验25、53、54、56、63,上海海洋大学李燕编写实验4、14、38~41、45、50、51、60,西南交通大学卢晓英编写实验24、46~49、65,天津科技大学夏婷编写实验3、20、29、42、57、58,电子科技大学中山学院李雪雁编写实验5、9、12、15、27,沈阳农业大学刘鹏举编写实验13、32~35。附录部分由王金亭和方俊提供,最后由王金亭和方俊负责全书的统稿工作,吴广庆也参与了部分校订工作。另外,杜希华、林佳、周存山、张小菊曾参与第一版的编写工作,华中科技大学出版社对本教材的编写给与了大力支持与帮助,在此谨致谢意。同时对选用的参考文献及有关材料的作者也表示衷心的感谢。
第二版教材虽经全体编者悉心勘校,疏漏和不妥之处仍在所难免,恳请广大读者继续给与热忱关注和支持,并提出宝贵意见。
王金亭,男,1966年生,教授,聊城大学东昌学院化学与生物系主任.长期从事生物化学教学与科研,编写教材《生物化学实验教程》(主编)、《生命科学导论》(主编)、《生物化学》(副主编)
第一篇生物化学实验基础
第1章生物化学实验的基本知识(3)
1.1实验室规范(3)
1.2玻璃仪器(6)
1.3生物化学实验常用仪器(11)
第2章生物化学实验的基本要求(19)
2.1实验样品的制备(19)
2.2实验的准确性与误差(24)
2.3实验记录和实验报告(26)
第3章生物化学基本实验技术(28)
3.1层析技术(28)
3.2电泳技术(36)
3.3离心技术(42)
3.4膜分离技术(49)
3.5光谱学技术(53)
3.6其他生物化学实验技术(62)
第二篇生物化学实验
第4章蛋白质(73)
实验1氨基酸和蛋白质的呈色反应(73)
实验2蛋白质等电点的测定和沉淀反应(77)
实验3血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐(79)
实验4蛋白质含量的测定(81)
Ⅰ双缩脲法测定蛋白质含量(81)
Ⅱ考马斯亮蓝结合法(Bradford法)测定蛋白质含量(83)
Ⅲ紫外光吸收法测定蛋白质含量(85)
Ⅳ微量凯氏定氮法测定总蛋白含量(86)
ⅤFolin酚法测定蛋白质含量(88)
实验5氨基酸的分离鉴定(90)
Ⅰ纸层析分离鉴定氨基酸(90)
Ⅱ离子交换层析分离混合氨基酸(91)
实验6血清蛋白的醋酸纤维素薄膜电泳(93)
实验7DNS氨基酸的制备和鉴定(95)
实验8DNP氨基酸的制备和鉴定(98)
实验9用DNS法鉴定蛋白质或多肽的N端氨基酸(100)
实验10SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离细菌总蛋白质(102)
实验11SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质的相对分子质量(104)
实验12牛乳中蛋白质的提取与鉴定(108)
实验13大豆蛋白的提取与含量测定(109)
实验14葡聚糖凝胶层析法分离纯化蛋白质(111)
第5章核酸(114)
实验15核酸含量的测定(114)
Ⅰ定磷法定量测定核酸(114)
Ⅱ地衣酚法定量测定RNA(116)
Ⅲ二苯胺法测定DNA含量(117)
实验16过碘酸氧化法定量测定核苷酸(118)
实验17酵母核糖核酸的分离及组分鉴定(121)
实验18菜花(花椰菜)中核酸的分离和鉴定(123)
实验19动物肝脏中DNA的提取(125)
实验20碱裂解法小量提取质粒DNA(127)
实验21DNA琼脂糖凝胶电泳(128)
实验22AMP、ADP和ATP的分离(130)
Ⅰ薄层层析分离AMP、ADP和ATP(130)
Ⅱ醋酸纤维素薄膜电泳鉴定AMP、ADP、ATP(132)
第6章酶学(134)
实验23酶的特性实验(134)
实验24米氏常数测定(135)
Ⅰ脲酶米氏常数的简易测定(135)
Ⅱ过氧化氢酶米氏常数的测定(137)
Ⅲ胰蛋白酶米氏常数的测定(139)
实验25酶活力的测定(140)
Ⅰ液化型淀粉酶活力的测定(140)
Ⅱ薄层层析法鉴定转氨酶活性(142)
Ⅲ分光光度法测定血液中转氨酶的活力(143)
实验26酶的制备(146)
Ⅰ乳酸脱氢酶粗提液的制备及活力测定(146)
Ⅱ枯草杆菌碱性磷酸酶的制备及酶活力的测定(147)
Ⅲ马铃薯多酚氧化酶的制备及性质实验(150)
实验27酶的固定化及对酶活性的影响(152)
实验28琥珀酸脱氢酶竞争性抑制(154)
实验29蔗糖酶相对分子质量的测定(SDSPAGE电泳法)(156)
第7章维生素和辅酶(159)
实验30紫外分光光度法测定鱼肝油中维生素A的含量(159)
实验31食物中脂溶性维生素含量分析(高效液相色谱)(160)
实验32维生素B1的定性测定(163)
实验33维生素B1的含量测定(164)
实验34荧光光度法测定维生素B2的含量(166)
实验35测定维生素C的含量(167)
Ⅰ2,6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的含量(167)
Ⅱ铜离子氧化法测定维生素C的含量(169)
Ⅲ磷钼酸法测定维生素C的含量(170)
实验36辅酶Q10的制备和检测(172)
实验37分离层析仪分离核黄素和血红蛋白(174)
第8章生物能学和物质代谢(177)
实验38丙酮酸含量的测定(分光光度法)(177)
实验39发酵过程中无机磷的利用(178)
实验40肌糖原酵解作用(179)
实验41糖酵解中间产物的鉴定(181)
实验42脂肪酸的β氧化(182)
实验432,6二氯酚靛酚显色反应测定电子传递(184)
实验44乳酸脱氢酶的递氢作用(186)
实验45氨基移换反应(187)
第9章综合性实验(190)
实验46糖的颜色反应(190)
ⅠMolisch反应鉴定醛糖(190)
ⅡSeliwanoff反应鉴定酮糖(191)
ⅢTollen反应鉴定戊糖(192)
实验47血糖含量的测定(193)
ⅠFolinWu法测定血糖含量(193)
ⅡFolinMalmors法测定血糖含量(194)
Ⅲ邻甲苯胺法测定血糖含量(196)
ⅣGODPAP法测定血糖含量(198)
实验48总糖和还原糖含量的测定(199)
Ⅰ蒽酮比色法测定糖的含量(199)
Ⅱ斐林试剂比色法测定糖的含量(201)
Ⅲ3,5二硝基水杨酸比色法测定糖的含量(203)
实验49脂类的测定(206)
Ⅰ索氏抽提法测定粗脂肪含量(206)
Ⅱ脂肪酸的测定(207)
Ⅲ血清甘油三酯简易测定法(208)
Ⅳ醋酸酐法测定血清中胆固醇含量(210)
实验50天然产物中多糖的分离、纯化与鉴定(211)
Ⅰ多糖的提取、纯化(211)
Ⅱ多糖的鉴定(212)
实验51血清蛋白的分离、纯化与鉴定(214)
实验52凝胶层析法分离纯化脲酶(217)
实验53小麦萌发前、后淀粉酶活力的比较(220)
实验54质粒DNA的分离、纯化及鉴定(222)
实验55多聚酶链式反应(PCR)技术扩增目的基因片段(225)
实验56重组质粒DNA的转化(227)
实验57感受态细胞的制备及转化(230)
实验58DNA的酶切分析(231)
实验59植物总黄酮的提取与测定(233)
实验60芦荟中活性成分的提取和纯化(234)
Ⅰ芦荟苷的提取和纯化(234)
Ⅱ高速逆流色谱法分离芦荟苷粗提物(236)
第10章设计性实验(240)
实验61半定量RTPCR检测基因的表达差异(240)
实验62卵磷脂的提取和鉴定(242)
实验63强酸性阳离子交换树脂在废水处理中的应用(244)
实验64转基因植物的PCR鉴定(246)
实验65卵黄高磷蛋白的提取(247)
附录(251)
附录A缓冲液的配制(251)
附录B常用实验数据表(256)
附录C硫酸铵饱和度常用表(261)
附录D层析技术实验数据(262)
参考文献(265)